Fmoc固相多肽合成步驟示例：合成多肽ACDER

1、合成CTC樹脂：稱取0.3g CTC Resin（如初始取代度約為1.0mmol/g）和0.4 mmol的Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反應器中，加入適量DCM溶解氨基酸（需要注意，此時CTC樹脂體積會增大好幾倍，避免DCM溶液過少），再加入樹脂0.9 mmol的DIPEA((Mw：129.1,d：0.740g/ml))，反應2-3小時后，可不抽濾溶液，直接加入1ml的HPLC級甲醇，封端半小時。依次用DMF洗滌2次，甲醇洗滌1次，DCM洗滌一次，甲醇洗滌一次，DCM洗滌一次，DMF洗滌2次(這里使用甲醇和DCM交替洗滌，是為了更好地去除其他溶質，有利于后續反應)。得到Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin備用。

2、脫Fmoc：加3倍樹脂體積的20%Pip/DMF溶液，鼓氮氣30分鐘，然后2倍樹脂體積的DMF 洗滌5次。得到H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin。（此步驟脫除Fmoc基團，茚三酮檢測為藍色）

3、縮合：取2.7mol Fmoc-Glu(OtBu)-OH 氨基酸，加入到上述樹脂里，加適當DMF溶解氨基酸，再分別加入1.8mol DIPEA，1.67mol HBTU。反應30分鐘后，用2倍樹脂體積的DMF 洗滌3次樹脂。（洗滌樹脂，去掉殘留溶劑，為下一步反應做準備）。得到Fmoc-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：樹脂=3：6：2.85：1（摩爾比）。

4、依次循環步驟二和步驟三，*終得到H2N-Ala-Cys(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Arg(Pbf)-CTC Resin

5、切割：6倍樹脂體積的切割液（或每1g樹脂加8ml左右的切割液），搖床搖晃 2小時，過濾掉樹脂，用冰無水乙醚沉淀濾液，并用冰無水乙醚洗滌沉淀物3次，*后將沉淀物放真空干燥釜中，常溫干燥24小試，得到粗品 Ala-Cys-Asp-Glu-Arg
切割液選擇：

1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前兩種適合沒有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三種適合幾乎所有的序列。）

6、純化凍干：使用液相色譜純化，收集目標峰液體，進行凍干，獲得蓬松的粉末狀固體多肽。不過這時要取小樣復測下純度 是否目標純度。

合肥合生生物專注于多肽合成方向研發十余年，從中也積累了豐富的多肽合成經驗，也屢次獲得合肥市嘉獎與表揚，如有多肽合成方面的需求，可以直接聯系小編VX:19956525566，也可百度搜索“合肥合生生物”。